rProtein A Beads
货号：R8290
规格：5ml
保存：2-8℃
产品介绍：
Protein A 是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白，主要通过Fc 片段结合哺乳动物
IgG，但是不与狗lgG 结合，不结合人lgM、lgD 和IgA。蛋白A 与蛋白G 不同来源及亚类
的免疫球蛋白结合能力丌一样，具体见表。天然Protein A 有五个IgG 结合区域和一些未知
功能的区域，重组protein A 去除了与白蛋白及细胞表面结合位点，只含有五个IgG 结合区
域，减少了非特异性吸附。
rProtein A Beads 产品性能：
指标 性能
基质 4%琼脂糖微球
配体 重组蛋白A
载量 >40mg人IgG/ml介质
粒径(μm) 45-165
最大流速 0.1 MPa,1 bar
pH稳定范围 3-12
储存缓冲液 20% 乙醇
储存温度 2°C-8°C
ProteinA和ProteinG对不同抗体的结合能力：
种属 亚型 Protein A Protein G
IgA varible —
IgD — —
IgE — —
IgG1 ++++ ++++
IgG2 ++++ ++++
IgG3 — ++++
IgG4 ++++ ++++
Human
IgM varible —
Avianeggyolk IgY — —
Solarbio
Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd
Tel: 010-56371207
Fax: 010-56371281/82
Http://www.solarbio.cn
Cow  ++ ++++
Dog  ++++ ++
Goat  — ++++
Guineapig IgG1 ++++ ++
IgG2 ++++ ++
Hamster + ++
Horse TotalIgG ++ ++++
Koala  — +
Liama  — +
Monkey(rhesus)  ++++ ++++
IgG1 + ++++
IgG2a ++++ ++++
IgG2b +++ +++
IgG3 ++ +++
Mouse
IgM variable —
Pig  +++ +++
Rabbit TotalIgG ++++ +++
IgG1 — +
IgG2a — ++++
IgG2b — ++
Rat
IgG3 + ++
Sheep TotalIgG +/- ++
++++=结合能力强；++=结合能力中等；—=结合能力弱或没有结合
纯化流程：
1、Buffer 的准备
所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm或0.45 μm滤膜过滤。
结合/ 洗杂Buffer: 0.15MNaCl，20 mMNa2HPO4，pH7.0
洗脱Buffer: 0.1M甘氨酸，pH3.0
中和液： 1MTris-HCl，pH8.5
2、样品准备
上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH 值，可以用结合/洗杂缓冲液对血清样
品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。
样品在上样前建议离心或用 0.22μm或 0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效
率和防止堵塞柱子。
3、样品纯化
1)将 rProtein A Beads 装入合适的层析柱，层析用5 倍柱体积的结合Buffer进行平衡，使
填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
2)将样品加到平衡好的 rProtein A Beads 中（保证目的蛋白与rProtein A Beads 充分接触，
提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
3)用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4)使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
5)依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱
体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4 度保存，防止填料被
细菌污染。
4、SDS-PAGE检测
将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用
SDS-PAGE 检测纯化效果。
填料清洗
rProtein A Beads 可以重复使用而无需再生，但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，
往往造成流速和结合载量都下降，严重影响柱子的性能，这时需要对树脂进行清洗。
去除一些沉淀或变性物质
用 2 倍柱体积的 6M 盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS,pH7.4 清
洗。
去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% TritonX-100清洗，然后然后立即用5
倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。
问题及解决⽅案
原因分析 推荐解决方案
筛板被堵塞 清洗或更换筛板
按照填料清洗部分进行树脂清洗
柱子反压过高
填料被堵塞
裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上柱
前使用滤膜(0.22 or0.45 μm)过滤，或
者离心去除。
样品纯化过程中 去除样品或柱子中的气泡
曲线不稳
样品或buffer 中有气
泡
样品和buffer 进行脱气
洗脱组分中没有目的蛋
白
样品中抗体浓度太低 使用其抗原做配体的介质
抗体被降解 适当的提高洗脱pH
回收率逐渐减低 上样量太多 减少上样量
柱子太脏，载量降低 按照填料清洗部分进行树脂清洗