操作步骤：

1. 制备脏器组织的单细胞悬液。

2. 在离心管中加入适量分离液（细胞悬液体积小于5mL时，加入5mL分离液；大于等于5mL，加入等体积分离 液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果），将细胞悬液平铺到分离液液面上 方，注意保持两液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取细胞悬液，然 后将细胞悬液小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显 的分层界面。如果样品较多，加样的时间较长，在离心之前出现红细胞成 团下沉属正常现象。）

3. 室温，水平转子500~1000g，离心20~30min（细胞悬液的体积越大所需的 离心力越大，离心时间越长，最佳的分离条件需摸索，离心转速最大不超 过1200g）。

4. 离心后将出现明显的分层：最上层是稀释的稀释液层；稀释液与分离液之 间是淋巴细胞层；分离液中为粒细胞层（个体差异或者是分离条件不同， 粒细胞层可能分离不明显）；最下层为红细胞层。

5. 小心的吸取淋巴细胞层及分离液层细胞到15mL洁净的离心管中，10mL PBS或细胞洗涤液洗涤细胞。250g，离心10min（如有红细胞混杂则加入 适量红细胞裂解液）

6. 弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。

7. 重复步骤6 8. 弃上清，细胞重悬备用