蒲若生物科技有限公司
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MTT方法简介： 四甲基偶氮唑盐比色法（MTT方法），是通过快速简便的颜色反应来检测细胞存活数量。其原理是MTT可作为哺乳类动物细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。当有活细胞存在时，线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成蓝紫色的针状甲月替（Formazan）结晶并沉积在细胞中，结晶物能被二甲基亚砜（DMSO）溶解，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其吸光度OD值，OD值的高低可间接反映活细胞的数量及其活性。
目前MTT法常用于以下几个方面的研究：
1、检测细胞活性：常作为细胞毒性试验的一种方法。
2、体外药物敏感实验：该方法简便、经济、快速，重复性好，所需的细胞数较少，没有放射性，目前广泛的用于临床前的抗癌药物的筛选研究。
3、一些细胞因子活性的研究
主要实验步骤如下：
1）将对数生长期细胞用胰酶消化后配制成浓度为1-10×104个／ml的细胞悬液，按1000-10000个细胞／孔接种于96孔板，每孔加100μl。
2）将平板置37℃、5％CO2湿度培养箱中24小时后，加入含有不同浓度受试样本的培养液100μl，每个样本不同浓度设平行的三个孔，对照组加不含样本的培养液100μl，再放入培养箱中孵育24-72小时，
3）用快速翻板法倒掉培养液，每孔加入用无血清1640按5mg／ml新鲜配制的MTT溶液100μl，温育4小时，使MTT还原为甲月替，再次倒掉上清液，每孔加DMSO（二甲基亚枫）200μl，用平板摇床摇匀后，使用酶标仪测定光密度值（OD）（参考波长450nm，检测波长570nm），以溶剂对照处理细胞为对照组。
客户方需提供：
样本描述，相关的实验设计内容如作用时间和样本浓度等。 |