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慢病毒系统的相关技术服务

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产品名称: 慢病毒系统的相关技术服务

英文名称: 慢病毒系统的相关技术服务

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通过Lentivectors慢病毒系统,可以有效地在所有的哺乳动物细胞转染和稳定表达不同分子或是报告基因(siRNA 、cDNA 、DNA 片段等)。首先,将目的基因克隆到质粒载体,再包装到假病毒载体基因组中,然后通过生产病毒液去感染宿主细胞。这个方式对于几乎所有哺乳动物细胞(包括一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等),都能取得极高的转染效率。引入宿主细胞的目的基因借助于慢病毒整合到宿主基因组,从而稳定、长期表达siRNA 、cDNA或是报告基因。内源性的表达siRNA 可以长期抑制目的基因,研究者可以得到稳定的细胞;在基因功能研究领域,也可以应用于转基因动物的研究;表达全长的cDNA可以作为一种研究gain-of-function的途径;稳定整合的报告基因提供了一种新的在染色质状态下研究转录调控的工具,也可以检测某些特殊的信号通路。实验中,慢病毒感染应用于细胞尤其是活体实验时,并不会像其他化学转染一样会引起非特异性反应。

本公司使用的慢病毒表达系统,它由三部分组成:
1. 慢病毒表达载体
2. 慢病毒包装质粒
3. 可产生假病毒颗粒的细胞系

慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。

目的基因
线性化的慢病毒穿梭质粒
测序鉴定目的基因
高质量的
重组载体
病毒包装质粒
共转染293T细胞
假病毒颗粒的包装和生产
收集假病毒颗粒
感染宿主细胞
目的基因在宿主细胞中进行表达

通过慢病毒系统,我们可以为您提供多方面的与之相关的技术服务,使用这一系统的目的,主要是为了解决以下问题:
● 对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,能大大提高目的基因转导效率,而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加,这就为RNAi,cDNA克隆以及报告基因的研究提供了一个有利的途径。
● 进行稳转细胞株的筛选;
● 为您的活体动物模型实验提供高质量的包含目的基因的病毒液;

▇ 基于慢病毒系统的RNAi技术服务
在RNAi的实验操作中,对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞,我们通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率,以达到目的基因的高效瞬时表达。在RNAi领域,这一系统还被应运于稳转细胞株的筛选和活体实验的RNAi研究方面。

目前,我们通过普通转染的方法进行RNAi实验,有明显的不足之处:
① siRNA进入细胞的效率不高,而且不同细胞之间差别很大,转染受细胞影响较为严重。一般来说,化学合成的siRNA转染进细胞的效率要高一些,但是实验操作条件要求苛刻;构建siRNA表达载体,操作要求相对较低,但是转染效率往往很不理想;
②筛选稳转细胞株难度很大;
③很难进行活体实验;

通过我们的Lentivectors慢病毒系统则可以很好的解决上述问题。