大鼠基质金属蛋白酶抑制因子2（TIMP-2）ELISA 试剂盒
产品英文名称：Rat tissue inhibitors of metalloproteinase 2,TIMP-2 ELISA kit
规格：48T/96T
检测方法：双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）
标本：血清，血浆，细胞上清液，组织等
种属：Rat\\鼠
试剂盒说明书：请来电或者邮件索取
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子2（TIMP-2）ELISA 试剂盒

实验材料与试剂配制：
1. 仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟，微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。
2. 洗液的配制：按 1:100的比例配制洗液备用。 样品收集、处理及保存
1. 细胞培养上清：适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。
2. 细胞：用PBS反复洗涤细胞 3次，调整细胞浓度达到10^4-10^6/ml左右，通过反复冻融，
使细胞破坏，并放出细胞内成份。或者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。
3. 血清： 在室温 下， 血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。
4. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置 10 -20 分钟后，
以1000×g离心15分钟，收集上清。
5. 体液：包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集 ，以 1000×g
离心、15 分钟 ，收集上清。
6. 组织标本：切取 组织标本，称取重量0.5mg加入500ul 的PBS，用手工或匀浆器，超声破碎仪，
将标本匀浆，以2000 -300rmp离心 20 分钟 ，收集上清进行检测 。
7. 样品 中不能含有 NaN3，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。
8. 保存 ：如果样品不能立即检测，应将其分装，-80 ℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现
沉淀，应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高脂。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在 37 ℃或更高的温度加热解 或更高的温度加热解 或更高的温度加热解或更高的温度加热解或更高的温度加热解冻。应在室温下解并确保样品均匀地充分解冻。
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子2（TIMP-2）ELISA 试剂盒
操作步骤 ：
1. 取出 试剂盒，室温（ 20 -25 ℃）放置 30 分钟。
2. 分组： 取出 96 孔板 根据待测样品数 量加上标准品的数量决定所需板条，把剩余的板条继续
冷藏处理，分别设标准品组（6个浓度）、空白 孔、待测样品组。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
3. 加样：依照标准品的顺序分别加入100ul 的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入100ul的
蒸馏水；其余微孔中加入100ul的待测样本。
4. 加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul 的酶标溶液 （空白对照孔除外）。
5. 温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于 37 ℃恒温孵育恒温孵育 1小时。
6. 洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置15 -30s 30s，充分清洗酶标板5次，用吸水纸彻底拍干。
7. 显色：各孔加入显色剂A液 50ul 后，再加入显色剂 B液 50ul 。
8. 终止： 25 -37 ℃下避光反应10 -15分钟， 加入 50 ul 终止液。
9. 读板：在 450nm波长读取各孔的O 值。注： 读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹，
读板时间控制在终止反应后的30 分钟内，以免影响准确性。
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子2（TIMP-2）ELISA 试剂盒