(Agarose IDA-Ni Matrix)
产品说明：
本试剂是络合金属镍离子的4％浓度的交联珠状琼脂糖基质，可用于结合和分离富含组氨酸等残基的蛋白质分子。
产品内容与储存方法：
|
名称 |
数量 |
保存条件 |
|
Agarose IDA-Ni |
10 ml/50 ml |
4℃ |
试剂瓶含有10 ml/50 ml亲和基质悬液(50 %)，保存于PBS中，含有20％乙醇作防腐剂。常温运输，4℃保存（切勿冻结）。
操作注意事项：
可以采用柱层析法或批次法操作。
1) 结合缓冲液一般采用磷酸或醋酸缓冲液，pH为中性。应避免加入高浓度金属络合剂如EDTA，枸掾酸，还原剂如DTT，Tris，HEPES等，离子型去污剂如SDS，Sarkosyl等。详见附表。可加入一定量的NaCl（0.15~0.5 M）以减少离子间相互作用。高浓度的盐酸胍（6 M）和尿素（8 M）存在时蛋白仍可有效亲和吸附。
2) 基质的蛋白结合容量因蛋白不同而有差异，一般每ml基质可结合数百微克至数毫克蛋白。
3) 可采用一定浓度的咪唑洗脱吸附的蛋白。通常250 mM以下浓度即可将亲和吸附的蛋白洗脱。
基质再生：
推荐仅用于相同蛋白分子纯化时重复使用。
1) 新鲜基质使用后，5倍柱床体积(CV)蒸馏水清洗，继以3 CV 20％乙醇清洗。4℃保存。
2) 新鲜基质使用3~5次后，按以下顺序清洗：5 CV蒸馏水，5 CV 100mM EDTA(pH 8.0)，5 CV蒸馏水，2 CV 100mM NiSO4，5 CV蒸馏水，3 CV 20％乙醇。4℃保存。
3) 严重污染基质，需先用2CV盐酸胍(6 M)清洗，5 CV蒸馏水洗后，继以3 CV 2% SDS清洗，再用升高梯度乙醇清洗残留SDS，降低梯度乙醇过渡至蒸馏水。然后按2步骤清洗保存。
附表：
|
可能对蛋白结合有影响的缓冲液成分 |
使用浓度应低于 |
|
Tris, HEPES, MOPS |
100 mM |
|
EDTA, EGTA |
1 mM |
|
2-mercaptoethanol |
20 mM |
|
DTT, DTE |
1 mM |
|
Triton, Tween, NP-40 |
2% |
|
SDS, Sarkosyl |
0.3% |